เอ็นไซม์มีปฏิสัมพันธ์อย่างไรกับคอมเพล็กซ์ที่จับคู่อย่างแน่นหนาเอ็นไซม์นั้นอาจถูกกระตุ้นและตัดดีเอ็นเออย่างผิด ๆ สามารถปรับเปลี่ยนให้มีความเที่ยงตรงสูงกว่าเป้าหมายที่กำหนดไว้ได้หรือไม่ผู้เขียนได้สร้างสายพันธุ์ใหม่และทดสอบความสามารถในการแยกแยะการแข่งขันที่ไม่สมบูรณ์ในขณะเดียวกัน พวกเขาพบว่ามนุษย์กลายพันธุ์หนึ่งซึ่งแยกแยะและปฏิเสธความไม่ตรงกันคู่เบสเดี่ยว

ระหว่าง gRNA และ DNA โดยไม่คำนึงถึงเป้าหมายเพิ่มความจงรักภักดีได้มากถึง 93 เท่าของเอนไซม์ดั้งเดิม พวกเขาแสดงให้เห็นว่าการกลายพันธุ์ได้รับผลกระทบส่วนหนึ่งของโดเมนการรู้จำภูมิภาคของเอนไซม์ที่ประสานการติดต่อระหว่างเอนไซม์และคอมเพล็กซ์ของ gRNA การกลายพันธุ์มีผลต่อการลดลงของการสัมผัสเหล่านั้นดังนั้นจึงมั่นใจได้ว่าเฉพาะการจับคู่ที่แข็งแกร่งที่สุดซึ่งมาจากการจับคู่ลำดับที่สมบูรณ์แบบเท่านั้นที่จะกระตุ้นกิจกรรมของเอนไซม์ การหลีกเลี่ยงความแตกแยกนอกกลุ่มเป้าหมายเป็นความท้าทายที่สำคัญสำหรับการพัฒนา CRISPR สำหรับการแทรกแซงทางการแพทย์เช่นการแก้ไขโรคทางพันธุกรรมหรือการกำหนดเป้าหมายเซลล์มะเร็ง ผลลัพธ์ของเราชี้ให้เห็นวิธีการพัฒนากลยุทธ์การรักษาด้วยยีนที่ปลอดภัยกว่า